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NuSmart^®核酸直接釋放技術(shù)應(yīng)用在細(xì)菌鑒定中

細(xì)菌屬于原核生物的一種，雖然結(jié)構(gòu)相對簡單，但是在生物界屬于數(shù)量最多的一類生物。細(xì)菌在生物界扮演著多重角色，既有乳品生產(chǎn)、抗生素生產(chǎn)、廢水處理等積極的一面，也有作為病原菌感染人和牲畜從而導(dǎo)致疾病傳播的危害一面。所以了解和控制細(xì)菌的特征和特性，對日常生產(chǎn)生活至關(guān)重要。

實驗室條件下，細(xì)菌的鑒定主要有培養(yǎng)、生化鑒定、血清學(xué)鑒定等，但是這些方法均費時費力，尤其是細(xì)菌培養(yǎng)。而分子生物學(xué)方法是近年來更多被應(yīng)用的方法，例如PCR技術(shù)。該技術(shù)對不易生長，培養(yǎng)條件復(fù)雜，未知細(xì)菌等表現(xiàn)良好。總結(jié)發(fā)現(xiàn)PCR在細(xì)菌中的應(yīng)用包括以下方向：

1、基于16S rDNA基因的快速鑒定；

2、特異性基因的鑒定，例如毒力基因、耐藥基因等；

3、食品微生物檢測；

4、細(xì)菌數(shù)量動態(tài)檢測；

5、常見呼吸道病原菌篩查；

6、細(xì)菌DNA圖譜制作等。

對于實驗室工作人員來說，細(xì)菌難培養(yǎng)，細(xì)菌增殖數(shù)量不夠，環(huán)境中細(xì)菌復(fù)雜程度高等難點。而能夠成功培養(yǎng)到目標(biāo)細(xì)菌，且數(shù)量達(dá)標(biāo)是PCR的關(guān)鍵前提。目前實驗室工作人員常用細(xì)菌DNA柱式提取試劑盒進(jìn)行基因組DNA的提取純化。該方法作為經(jīng)典方法長期被使用，但是整個操作過程需要40-90分鐘不等，使用溶菌酶和蛋白酶K等生物活性酶類，多次反復(fù)離心，步驟繁多、使初學(xué)的操作者體驗樂趣嚴(yán)重降低。我司開發(fā)的NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒che底解決以上痛點問題。優(yōu)點如下：

—對樣本量要求低（1-2uL菌液，1個菌斑）

—操作快速（5分鐘釋放基因組DNA）

—操作簡單

—檢出率達(dá)99.99%

案例A 對數(shù)生長期細(xì)菌快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理對數(shù)生長期菌液，2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。

案例B 單菌落快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理菌斑（至于生理鹽水中），2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。

案例C 甘油菌快速擴(kuò)增16S rDNA

革蘭氏陰性菌：1 大腸桿菌 2 胞曼氏不動桿菌 3 肺炎克雷伯菌 4 奇異變形桿菌 5 銅綠假單胞菌

革蘭氏陽性菌：6 蠟狀芽孢桿菌 7 糞腸球菌 8 肺炎鏈球菌 9 金黃色葡萄球菌 10 假中間葡萄球菌

使用NuSmart^®微生物 PCR 試劑盒（貨號Nu-Mi01）處理甘油菌，2× MIC Smart Mix擴(kuò)增16S rDNA基因。