一．RAW264.7細胞

細胞取材于Abelson小鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤組織，是科研上尤為常用的炎癥細胞模型之一。該細胞易于增殖，有高效DNA轉(zhuǎn)染力，對RNA干擾敏感，常用作轉(zhuǎn)染宿主細胞和復制小鼠諾如病毒。細胞有sIg-、Ia-、Thy-1.2抗原陰性。據(jù)報道，該細胞建系后已不分泌且檢測不到病毒顆粒，XC斑點形成實驗陰性。可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞，LPS或PPD處理2天后可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。

二、產(chǎn)品說明

1、產(chǎn)品名稱

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

2、包裝規(guī)格

貨號：AD600150

規(guī)格：1.5ml

3、儲存條件

常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復凍融。

三、產(chǎn)品應用

各種細胞類型中最高的轉(zhuǎn)染效率。

可用于多種真核細胞系的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染和共轉(zhuǎn)染；

可用于各種原代細胞的DNA轉(zhuǎn)染、siRNA轉(zhuǎn)染；

可轉(zhuǎn)染極度難轉(zhuǎn)染的免疫細胞、懸浮細胞，如:T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等；

可高效率轉(zhuǎn)染siRNA到任何哺乳動物細胞。

四、使用說明

1、材料準備

RNA 濃度 20 uM /L

質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無菌雙蒸水或超純水；②無內(nèi)毒素 ）

2、操作步驟

提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

核酸復合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照 1:1 關系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜 止 10-15 分鐘。

在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基 里面可以含有血清。

細胞換液：轉(zhuǎn)染 24 小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

分析結(jié)果：質(zhì)粒 DNA 轉(zhuǎn)染 48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。若 進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后 24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA 轉(zhuǎn)染后 9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72 小時檢測 mRNA 或蛋白表達。